室內培育猴頭菇的方法有瓶栽和開放式等種，培養料有鋸木屑，棉籽皮等：猴頭菇菌絲體生長的適宜溫度是22～28℃；子實體生長的適宜溫度是18～22℃，溫度過低則子實體生長速度緩慢。菌絲體對濕度的要求為60％，子實體對濕度的要求為85～95％。 

　　一、菌種分高培育猴頭菇首先要進行菌種分離。菌種分離有孢子分離和組織分離兩種方法。孢子分離是在無菌的條件下采集猴頭菇成熟后將散放的孢子，作為培育菌絲的原料。組織分離是取新鮮幼嫩的子實體，放入接種箱，在無菌的條件下切開菇體，取中間充實、肉質較好的一塊組織，約米粒大小，放入試管中的斜面培養基上。培養基用去皮的馬鈴薯和洋菜，葡萄糖拌勻做成，比例為200：20：20，加水1000克，將pH值調至5．5～6，然后分別裝入玻璃試管，不要裝滿，經高壓消毒滅菌并使之形成傾斜面。經接種后將試管放入25℃的恒溫箱培養3天，接種塊即開始萌發菌絲；20～25天時絲茵長滿培養基表面，即可挑選生長良好，無雜菌的培養，待菌絲長滿試管培養基的斜面，即可開始培養栽培種。

　　二、栽培種的培養栽培種的培養料可用鋸木屑（不含芳香油或殺茵劑）或棉子皮等，配料比例可選擇：

　　（1）鋸木屑78％、麩皮20％、石膏l％、白糖1％；

　　（2）棉子皮98％、石膏l％、白糖1％；

　　（3）鮮酒糟80％、麩皮10％、糠9％、石膏粉1％（加無機鹽營養液，配方為：硫酸銨3％、磷酸二氫鉀1％、硫酸鎂0．1％，用乳酸調至pH值為4。

　　（4）將培養基料加60～65％水拌勻，手捏時指縫間有水漬而不滴為宜。然后，裝瓶至瓶肩處搗實，在14．7牛頓壓力下滅菌1小時。滅菌后用無菌操作挑取斜面菌種一塊，投入培養基瓶內，使溫度達到20～25℃，空氣相對濕度達到60～65％，塞上棉塞。約30～40天，菌絲長滿培養料，形成菌膜。當菌膜上子實體原基接近棉塞時，拔去棉塞。

　　三、子實體的培養開放式栽培猴頭菇系將闊葉樹木屑在高壓下消毒，或者在鍋中煮20分鐘，撈出瀝去水份，待涼后直接拌入40％左右的瓶內菌種，拌好后裝入塑料袋或用薄膜包起來。袋口或包扎口裝上棉塞通氣，放在10℃以下的低溫中進行培養，待長成菌塊后，揭去薄膜，再在自然溫度下繼續培養，幾個月后即可長出猴頭菇。這種方法和瓶栽產量相近，但節約菌種、瓶子，可較大規模生產。瓶栽猴頭菇則在棉塞拉開后，室溫保持在18～20℃，如溫度過高時，中午關閉門窗，早晚溫度較低時通風；如溫度低時，可在中午通風。室內濕度保持在85～95％，過低時可在地面潑水，保持經常潮濕，同時每天還可在空間噴霧3～4次，半個月后即可形成子實體。用鋸木屑和棉子皮做培養料相比，棉子皮具有發菌快，雜菌少、子實體形成早等特點，比鋸木屑提前半月左右形成子實體。